產(chǎn)品描述

All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷且高質(zhì)量的單鏈 cDNA 合成試劑盒，包含熱穩(wěn)定的 M-MLV GIII 逆轉(zhuǎn)錄酶及其反應(yīng)緩沖液、RNA 酶抑制劑、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物等所有逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需組分，僅需添加 RNA 模板和水即可啟動反應(yīng)，生成的 cDNA 主要用于后續(xù)的 qPCR 分析。

提取的RNA 樣本常存在基因組DNA（gDNA）污染，可能導(dǎo)致gDNA 與 cDNA 在 qPCR 中同時擴(kuò)增，影響定量準(zhǔn)確性。本試劑盒通過 dsDNase 高效去除gDNA，特異性降解雙鏈 DNA或DNA-RNA 雜合鏈中的 DNA 鏈，并在逆轉(zhuǎn)錄溫度下快速不可逆失活。與傳統(tǒng)使用的 DNase I對比，無需額外 EDTA 處理，簡化實(shí)驗(yàn)流程，降低逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的抑制風(fēng)險。

本試劑盒可在同一管中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和gDNA去除兩個反應(yīng)，操作簡便，可有效降低復(fù)雜加樣過程造成的樣品污染和 RNA 降解的風(fēng)險。但若基因組污染嚴(yán)重程度，建議選擇采用去除gDNA 污染與逆轉(zhuǎn)錄分開進(jìn)行的操作方法。

訂購信息

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃保存，有效期24個月。

使用方法

1. 針對基因組 DNA 含量低的 RNA 樣品（推薦方案）

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：

a . 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量 RNA 作為模板。

② 37℃溫育 2 min，以去除gDNA 污染；

③ 55℃溫育 15 min；

④ 反應(yīng)結(jié)束后，85℃溫育 5 min 以終止反應(yīng)；

⑤ 迅速將獲得的 cDNA 置于冰上，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；或立即保存于 -20℃。

2. 針對基因組 DNA 含量高的 RNA 樣品

(1)  基因組 DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：

a.    推薦采用試劑盒提取的 RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 37℃溫育 2 min，以去除基因組 DNA 污染；

注：若 RNA 中基因組 DNA 污染嚴(yán)重，可適當(dāng)延長 37℃溫育時間至 5 min。

④ 65℃溫育 2 min，使 dsDNase 失活， 冰上放置。

(2)  第一鏈 cDNA 合成

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系：

② 輕柔吸打混勻，瞬離；

③ 50℃溫育 15 min；

注：若目標(biāo) RNA 不含 Poly(A) 結(jié)構(gòu)，可預(yù)先 25℃溫育 10 min。

④  反應(yīng)結(jié)束后， 85℃溫育 5 min，以終止反應(yīng)；

⑤ 將獲得的 cDNA 溶液置于冰上，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注：cDNA 溶液置于 -20℃儲存，建議不超過 1 周；置于 -80℃可長期儲存。

注意事項(xiàng)

1. 預(yù)混液中已包含 Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物，適用于含有 Poly(A) 結(jié)構(gòu)的真核生物 mRNA，以及不含 Poly(A) 結(jié)構(gòu)的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板，但不適用于 miRNA 等小RNA模板。

2. 由于隨機(jī)引物會在RNA的任意位置啟動逆轉(zhuǎn)錄，因此不建議使用本產(chǎn)品進(jìn)行真核生物全長cDNA的克隆。

3. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。